biosb BSB 3666說(shuō)明書(shū)
TintoFast Cytokeratin 5 & 6 Antibody Immunohistochemistry on a Frozen Acetone-Fixed Melanoma Tissue
| 有可能的使用 | 用于莫氏體外診斷 | |||||||||||||||||||
| 總結(jié)與說(shuō)明 | 細(xì)胞角蛋白 5 (58 kDa) 是一種高分子量、基本類(lèi)型的細(xì)胞角蛋白，在復(fù)層上皮細(xì)胞以及移行上皮細(xì)胞、復(fù)雜上皮細(xì)胞、間皮細(xì)胞和間皮瘤的基底、中間和表層細(xì)胞層中表達(dá)。細(xì)胞角蛋白 6 (56 kD) 也是一種高分子量、堿性類(lèi)型的細(xì)胞角蛋白，由增殖的鱗狀上皮表達(dá)，通常與細(xì)胞角蛋白 16 配對(duì)。 TintoFast 細(xì)胞角蛋白 5 和 6 在幾乎 100% 的惡性間皮瘤中呈陽(yáng)性，在肺腺癌中很少見(jiàn)。TintoFast Cytokeratin 5 和 6 在未分化的大細(xì)胞癌和鱗狀細(xì)胞癌中呈陽(yáng)性。不到 10% 的乳腺癌、結(jié)腸癌和前列腺癌對(duì)該標(biāo)志物呈陽(yáng)性染色。CK 5 和 6 也已成功用作前列腺中的肌上皮細(xì)胞標(biāo)記物來(lái)確定惡性腫瘤。 | |||||||||||||||||||
| 抗體類(lèi)型 | 小鼠單克隆 | 克隆 | D5/16B4 | |||||||||||||||||
| 同型 | IgG1 | 反應(yīng)性 | 石蠟，冷凍 | |||||||||||||||||
| 本土化 | 細(xì)胞質(zhì) | 控制 | SCC/密件抄送 | |||||||||||||||||
| 介紹 | Anti-CK 5 & 6 是一種小鼠單克隆抗體混合物，來(lái)源于細(xì)胞培養(yǎng)上清液，經(jīng)過(guò)濃縮、透析、過(guò)濾滅菌和稀釋在 pH 7.5 的緩沖液中，其中含有 BSA 和疊氮化納作為防腐劑。 | |||||||||||||||||||
| 可用性 |
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莫氏冷凍組織的標(biāo)本制備
將標(biāo)本嵌入 OCT 中的低溫恒溫器內(nèi)。
在 4-5 µm 處切割切片并安裝在帶正電的載玻片上，例如 Bio SB Hydrophilic Plus 載玻片 (BSB 7028) 或 TintoDetector 蓋間隙載玻片 (BSB 7006) 的下三分之一處。
在室溫下風(fēng)干載玻片 2 分鐘，然后在培養(yǎng)箱或干浴中在 60°C 下孵育載玻片 3 分鐘。
在室溫下用 100% 丙酮或 10% NBF 固定 2 分鐘。如果使用 Bio SB Mohs ImmunoDigestor，使用 10% NBF 10% 會(huì)產(chǎn)生更好的形態(tài)。
對(duì)于固定在丙酮中的載玻片，讓它風(fēng)干。對(duì)于 NBF 中的幻燈片，用蒸餾水沖洗并風(fēng)干。
莫氏冷凍組織的預(yù)處理
將載玻片轉(zhuǎn)移到 ImmunoDNA Washer、TBST 或 PBST 緩沖液中。
使用 Mohs ImmunoDigestor 進(jìn)行 PIER、蛋白水解消化 1 分鐘。在室溫下。
用 ImmunoDNA Washer、TBST 或 PBST 緩沖液沖洗。
IHC 檢測(cè)程序
PIER 后，將載玻片轉(zhuǎn)移至 ImmunoDNA 清洗機(jī)，靜置 1-2 分鐘。
對(duì)于手動(dòng)染色，在環(huán)境溫度下進(jìn)行抗體孵育。對(duì)于自動(dòng)染色方法，請(qǐng)根據(jù)儀器制造商的說(shuō)明進(jìn)行抗體孵育。
用 ImmunoDNA 洗滌器或去離子水清洗載玻片。
繼續(xù) IHC 檢測(cè)協(xié)議。用 ImmunoDNA 洗滌液在每個(gè)步驟之間清洗載玻片。
縮寫(xiě) Mohs PolyDetector DAB HRP Brown of HRP Green 免疫組化方案
用過(guò)氧化物酶阻滯劑孵育載玻片 30 秒
用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗
與一抗孵育 4 分鐘
用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗
用 HRP 標(biāo)簽孵育 3 分鐘
用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗
準(zhǔn)備
DAB Brown（在 1ml DAB 緩沖液中加入 1 滴 DAB Chromogen；充分混合）
或 HRP Green（在 1 ml HRP Green Buffer 中加入 1 滴 HRP Green Chromogen；充分混合）
用 DAB 或 HRP Green 孵育 2 分鐘
用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗
用蘇木精或核固紅復(fù)染 30 秒
用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗
使用 AquaMounter 安裝或使用 Fast ChromoProtector 使組織脫水，然后使用 PermaMounter 安裝
| 步 | Mohs PolyDetector HRP Green 或 DAB 協(xié)議 |
| 過(guò)氧化物酶阻滯劑 | 30秒 |
| 一抗 | 4分鐘。 |
| 第一步檢測(cè)（HRP 標(biāo)簽） | 3 分鐘。 |
| 底物色原 | 1-2 分鐘。 |
| 復(fù)染/蓋玻片 | 變化 |
此協(xié)議也可用于使用檸檬酸鹽或 EDTA 檢索的 FFPE 組織。
